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《中国视神经脊髓炎谱系疾病诊断与治疗指南(2021版)》,实验室诊断一览!

发表时间:2022-04-02 09:16作者:RSRTJ


视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)是一种主要累及青壮年人群,复发率和致残率极高的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病。2019年9月27日NMPA批准了国内首例水通道蛋白(AQP4)抗体检测试剂盒(酶联免疫法)的上市,用于体外定量测定人血清中水通道蛋白抗体(AQP4 Ab)的含量。该试剂盒(RSR, AQP4 Ab Version 2)来自天津阿斯尔生物科技有限公司,注册号:国械注进20192400461。


2021年12月中国免疫学会神经免疫分会组织国内专家重磅发布了2021版《中国视神经脊髓炎谱系疾病诊断与治疗指南》(以下简称《指南》),在实验室诊断方面,较前版有较大的补充,重申了AQP4-IgG在诊断中的重要性。AQP4-IgG是具有高度特异性的诊断标志物,特异度高达90%,敏感度约为70%。



小编重点梳理了2021版《指南》中关于实验室诊断要点的更新:



指南解读-抗体检测方法


►指南

推荐使用基于细胞转染的免疫荧光技术(cell based transfection immunofluorescence assay, CBA)或流式细胞术进行血清检测。


解读:

指南中所推荐的CBA和流式细胞术大多数为实验室检测方法,高度依赖检测人员的操作水平(细胞转染水平,不同转染技术的选取,检测结果判读等)。


►指南

可使用酶联免疫吸附试验纵向监测抗体滴定度对疾病进展和治疗。


解读:

2021版《指南》较2016年版明确了抗体定量检测的意义,并充分肯定了ELISA法获得的定量结果对制定临床诊疗方案的辅助意义。


►指南

酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)灵敏度高,特异度有所降低。


解读:

我们查阅了指南的征引文献【53-55】,进一步分析文章的数据和结论来源。


灵敏度: 三例文献中ELISA法的灵敏度最高,优于间接免疫荧光(IIF)法、免疫组化(IHC)法和基于细胞的检测(CBA)法。


特异性:综合特异性排名:IIF=ELISA=CBA≥IHC

文献【53】中ELISA法的特异性最高,优于IHC法。

文献【54】中ELISA法的特异性略低于基于组织的IIF法(IIF-tissue法),与基于细胞的IIF法(IIF-AQP4,CBA法)一致。

文献【55】中ELISA法的特异性与参比方法基于组织的IIF法一致。



征引文献详解:


01 文献【53】:S. Jarius等(2012)


入组样本:共261例

●   NMOSD疾病组(108例):

66例视神经脊髓炎(NMO),25例长节段横贯性脊髓炎(LETM),14例复发性视神经炎(ON),3例非长节段横贯脊髓炎/视神经炎(NETM/ON)


●   对照组(153例):

109例多发性硬化(MS),39例其他神经系统疾病(OND), 5例健康对照(HC)


检测方法:

●   ELISA法

RSR, AQP4 Ab Version 1

现款2代试剂盒全面优于文中1代性能

检测全部样本(261例)


●   免疫组化法

检测部分样本(207例)


检测结果(表1)

1. 灵敏度:

ELISA法灵敏度高。ELISA法灵敏度在下列疾病亚组(单发或多发症状患者)中均高于IHC法:50/66例(75.8%)NMO患者,17/25例(68%)LETM患者,3/14例(21.4%)ON患者,2/3例(66.7%)ON合并非广泛性横断脊髓炎患者。在针对性更强的NMOSD患者中,同时接受双方法学检测的结果中ELISA法仍维持更高的阳性率(10例ELISA检测单阳性,3例IHC检测单阳性)。


2. 特异性:

数据证实ELISA法特异性高于IHC法:在对照组中,151/153例(98.7%)患者呈AQP4抗体阴性(ELISA法),116/118例(98.3%)患者呈AQP4抗体阴性(IHC法)。


3. 重复性:

ELISA在AQP4抗体检测方面上具有很好的批内和批间重复性。


4. 定量意义:

血清中AQP4抗体浓度与疾病活跃程度相关(p<0.00001)。


表1 261例患者和对照的人口学、临床和血清学结果

注:m =男性;f =女性;pLR =阳性似然比;nLR =阴性似然比;n.d.=不确定;n.a.=不适用


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02 文献【54】:Yoon-Joo Kim等(2012)


入组样本:共124例

NMOSD疾病组(54例):

9例NMO,32例视神经炎(ON),13例横贯性脊髓炎(TM)


疾病对照组(70例)

10例MS(包括两例视神经脊髓OSMS),60例OND


检测方法:

●   组织间接免疫荧光法(IIF-tissue)

小鼠小脑组织


●   CBA法(IIF-AQP4)

转染人AQP4的HEK293细胞 (EUROIMMUN, Germany)


●   ELISA法

商用检测试剂盒(DLD diagnostika GmbH, Germany)


检测结果(表2)

1. 灵敏性:

ELISA法优于IIF-tissue法和CBA法。

ELISA法在NMOSD疾病组(11/54,20.4%)中和NMO疾病亚组(5/9,55.6%)中阳性检出率最高。


2. 特异性:

在疾病对照组中,三种方法的抗体阴性检出例数仅相差一例,总体特异性相差不大(IIF-tissue法为68/70,97.1%;CBA法与ELISA法特异性一样,为67/70,95.7%)。


表2 三种方法在不同疾病组患者中AQP4抗体的血清阳性率

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03 文献【55】:Tampoia M等(2019)


入组样本:共81例

●   NMOSD疾病组(54例):

24例NMO,24例LETM,13例ON,3例脊髓炎(Myelitis)


●   对照组(27例):

17例MS,10例健康供血者(HS)


检测方法:

●   ELISA法

RSR, AQP4 Ab Version 2

全自动检测系统(SkyLAB 752)


●   组织间接免疫荧光法(IIF-tissue)

基于灵长类组织


检测结果(表3)

1. 方法学间一致性强:

ELISA检测结果与参照方法IIF-tissue法的一致性达100%。


2. 临床准确度:

NMO患者中检测AQP4抗体的灵敏度为83.3%,特异性为100%。


3. 定量意义:

NMO患者的AQP4抗体中位数浓度高于LETM患者(p=0.00006)或其他NMOSD患者及对照组(p < 0.0001)。


4. 文章结论:

新款ELISA试剂盒在全自动化的系统上体现出较高的灵敏度和极高特异性,精密度高(CV值小),可以提供客观的定量结果。


表3 患者和对照组的人口统计学、临床和血清学特征

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