《中国视神经脊髓炎谱系疾病诊断与治疗指南（2021版）》，实验室诊断一览！发表时间：2022-04-02 09:16 视神经脊髓炎谱系疾病（NMOSD）是一种主要累及青壮年人群，复发率和致残率极高的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病。2019年9月27日NMPA批准了国内首例水通道蛋白（AQP4）抗体检测试剂盒（酶联免疫法）的上市，用于体外定量测定人血清中水通道蛋白抗体（AQP4 Ab）的含量。该试剂盒（RSR, AQP4 Ab Version 2）来自天津阿斯尔生物科技有限公司，注册号：国械注进20192400461。 2021年12月中国免疫学会神经免疫分会组织国内专家重磅发布了2021版《中国视神经脊髓炎谱系疾病诊断与治疗指南》（以下简称《指南》），在实验室诊断方面，较前版有较大的补充，重申了AQP4-IgG在诊断中的重要性。AQP4-IgG是具有高度特异性的诊断标志物，特异度高达90%，敏感度约为70%。 小编重点梳理了2021版《指南》中关于实验室诊断要点的更新：  指南解读-抗体检测方法 ►指南 推荐使用基于细胞转染的免疫荧光技术（cell based transfection immunofluorescence assay, CBA）或流式细胞术进行血清检测。 解读： 指南中所推荐的CBA和流式细胞术大多数为实验室检测方法，高度依赖检测人员的操作水平（细胞转染水平，不同转染技术的选取，检测结果判读等）。 ►指南 可使用酶联免疫吸附试验纵向监测抗体滴定度对疾病进展和治疗。 解读： 2021版《指南》较2016年版明确了抗体定量检测的意义，并充分肯定了ELISA法获得的定量结果对制定临床诊疗方案的辅助意义。 ►指南 酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）灵敏度高，特异度有所降低。 解读： 我们查阅了指南的征引文献【53-55】，进一步分析文章的数据和结论来源。 灵敏度： 三例文献中ELISA法的灵敏度最高，优于间接免疫荧光(IIF)法、免疫组化(IHC)法和基于细胞的检测(CBA)法。 特异性：综合特异性排名：IIF=ELISA=CBA≥IHC 文献【53】中ELISA法的特异性最高，优于IHC法。 文献【54】中ELISA法的特异性略低于基于组织的IIF法（IIF-tissue法），与基于细胞的IIF法（IIF-AQP4，CBA法）一致。 文献【55】中ELISA法的特异性与参比方法基于组织的IIF法一致。 征引文献详解： 01 文献【53】：S. Jarius等（2012） 入组样本：共261例 ● NMOSD疾病组（108例）： 66例视神经脊髓炎（NMO），25例长节段横贯性脊髓炎（LETM），14例复发性视神经炎（ON），3例非长节段横贯脊髓炎/视神经炎（NETM/ON） ● 对照组（153例）： 109例多发性硬化（MS），39例其他神经系统疾病（OND）, 5例健康对照(HC) 检测方法： ● ELISA法 RSR, AQP4 Ab Version 1 现款2代试剂盒全面优于文中1代性能 检测全部样本（261例） ● 免疫组化法 检测部分样本（207例） 检测结果（表1） 1. 灵敏度： ELISA法灵敏度高。ELISA法灵敏度在下列疾病亚组（单发或多发症状患者）中均高于IHC法：50/66例(75.8%)NMO患者，17/25例(68%)LETM患者，3/14例(21.4%)ON患者，2/3例(66.7%)ON合并非广泛性横断脊髓炎患者。在针对性更强的NMOSD患者中，同时接受双方法学检测的结果中ELISA法仍维持更高的阳性率（10例ELISA检测单阳性，3例IHC检测单阳性）。 2. 特异性： 数据证实ELISA法特异性高于IHC法：在对照组中，151/153例(98.7%)患者呈AQP4抗体阴性（ELISA法），116/118例（98.3%）患者呈AQP4抗体阴性（IHC法）。 3. 重复性： ELISA在AQP4抗体检测方面上具有很好的批内和批间重复性。 4. 定量意义： 血清中AQP4抗体浓度与疾病活跃程度相关(p＜0.00001)。 表1 261例患者和对照的人口学、临床和血清学结果  注：m =男性；f =女性；pLR =阳性似然比；nLR =阴性似然比；n.d.=不确定；n.a.=不适用 / 02 文献【54】：Yoon-Joo Kim等（2012） 入组样本：共124例 ● NMOSD疾病组（54例）： 9例NMO，32例视神经炎（ON），13例横贯性脊髓炎（TM） ● 疾病对照组（70例）： 10例MS（包括两例视神经脊髓OSMS），60例OND 检测方法： ● 组织间接免疫荧光法(IIF-tissue) 小鼠小脑组织 ● CBA法(IIF-AQP4) 转染人AQP4的HEK293细胞 (EUROIMMUN, Germany) ● ELISA法 商用检测试剂盒（DLD diagnostika GmbH, Germany） 检测结果（表2） 1. 灵敏性： ELISA法优于IIF-tissue法和CBA法。 ELISA法在NMOSD疾病组（11/54，20.4%）中和NMO疾病亚组（5/9，55.6%）中阳性检出率最高。 2. 特异性： 在疾病对照组中，三种方法的抗体阴性检出例数仅相差一例，总体特异性相差不大（IIF-tissue法为68/70，97.1%；CBA法与ELISA法特异性一样，为67/70，95.7%）。 表2 三种方法在不同疾病组患者中AQP4抗体的血清阳性率  / 03 文献【55】：Tampoia M等（2019） 入组样本：共81例 ● NMOSD疾病组（54例）： 24例NMO，24例LETM，13例ON，3例脊髓炎（Myelitis） ● 对照组（27例）： 17例MS，10例健康供血者（HS） 检测方法： ● ELISA法 RSR, AQP4 Ab Version 2 全自动检测系统（SkyLAB 752） ● 组织间接免疫荧光法（IIF-tissue） 基于灵长类组织 检测结果（表3） 1. 方法学间一致性强： ELISA检测结果与参照方法IIF-tissue法的一致性达100%。 2. 临床准确度： NMO患者中检测AQP4抗体的灵敏度为83.3%，特异性为100%。 3. 定量意义： NMO患者的AQP4抗体中位数浓度高于LETM患者（p=0.00006）或其他NMOSD患者及对照组(p < 0.0001)。 4. 文章结论： 新款ELISA试剂盒在全自动化的系统上体现出较高的灵敏度和极高特异性，精密度高（CV值小），可以提供客观的定量结果。 表3 患者和对照组的人口统计学、临床和血清学特征  / |
