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重症肌无力自身抗体检测

发表时间:2018-04-03 00:00


重症肌无力(Myasthenia gravisMG)是由于自身免疫反应导致的神经-肌肉接头处传递功能障碍,临床主要表现为部分或全身骨骼肌无力和易疲劳,活动后症状加重,经休息后症状减轻。患病率为77150/100万,女性患病率大于男性,比例约32,各年龄段均有发病,儿童15岁居多。

抗体检测对重症肌无力的诊断具有重要的意义[1-4]

患者体内自身免疫反应产生的乙酰胆碱受体抗体(Acetylcholine receptor autoantibodiesAChRAb)可作用于神经-肌肉接头处的乙酰胆碱受体,从而导致传递功能障碍,引发重症肌无力。因此,AChRAb是诊断重症肌无力的重要标志物[1-2]

约80%重症肌无力患者可检测到胸腺病变,在这其中约10%的患者会发展为胸腺上皮细胞瘤(TET)或胸腺癌。因此尽早对胸腺瘤做出诊断,并施行胸腺切除术有助于患者取得较好的预后效果,检测Titin抗体对于诊断胸腺瘤重症肌无力具有重要[3]

肌肉特异性受体酪氨酸激酶抗体( Muscle-specific receptor tyrosine kinasMuSK Ab),是重症肌无力的又一重要标志物[4]。因为在重症肌无力患者中,10%-20%患者血清中检测不出乙酰胆碱受体抗体,称之为血清阴性MG。但其中约50%的血清阴性MG中可检测出MuSK 抗体。通过对MuSK抗体的检测,可以更全面地辅助诊断重症肌无力。


(一)乙酰胆碱受体抗体(AchRAb)检测

RSR AchRAb检测原理:

人血清中的乙酰胆碱受体抗体与不同的AChR单克隆抗体 (MAb1MAb2MAb3) 竞争相似的AChR结合位点。当样本中不存在AChR抗体时,形成MAb1- AChR- MAb2-/MAb3- 生物素复合物,通过加入链霉素过氧化物酶及其显色底物,检测已结合在微孔板中的AChR。在波长450nm处读取吸光值。当样本中存在AChR抗体时,MAb1-AChR-MAb2-/MAb3-生物素复合物的形成受到抑制,导致SA-POD结合量减少,最终反应物在450nm吸光度减少。待测血清中AChRAb浓度越高,抑制MAb-生物素结合的作用越明显。


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检测流程


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试剂盒特点

首创ELISA法定量检测乙酰胆碱受体抗体。

灵敏度:92%,于83例重症肌无力病的患者血清样本。

特异性:100%,于302例健康志愿者的血清。

标准品范围:0.5 – 20 nmol/L

临界值:阴性: < 0.45 nmol/L; 阳性: ≥ 0.45 nmol/L

最低检测限:0.25 nmol/L

适用范围:于各级医院临检实验室使用并可与自动化检测系统配套使用。

适用仪器:酶标仪(波长为405nm450nm

样本要求:100微升人血清,避免使用脂血、溶血及血浆样本。

组分性状:96孔板,液体和冻干粉。

储存条件及有效期:2-8ºC保存,有效期为9个月。


(二)肌联蛋白抗体(Titin Ab)检测

Titin Ab ELISA检测原理:

多数胸腺受影响的患者体内会产生乙酰胆碱受体抗体(AChRAb),这个抗体可以用RSR AChRAb ELISA 试剂盒检测诊断重症肌无力。同时,患者体内会产生针对条纹肌的自身抗体,即包含肌联蛋白(Titin)抗体。肌联蛋白是条纹肌中具有极高分子量的蛋白质。它的主要免疫应答区位于其中一个分子量为30 kDa的蛋白片段上。针对这个片段的抗体可能会与乙酰胆碱受体的抗原决定簇进行交叉结合,即成为副肿瘤综合症型重症肌无力的病因。因此在本产品中使用了重组的肌联蛋白片断(MGT30肽段)作为检测抗原,经证实本试剂盒使用的酶联免疫检测法优于基于人或猴条纹肌切片的免疫荧光检测法。


Titin Ab Elisa操作流程:

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(三)乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)检测(RIA法)

RSR AChRAb RIA检测原理

人血清中存在两种类型AChR:成人型和胎儿型。两者的主要区别在于胎儿型具有α2βγδ结构(胎儿型特有AChR-γ亚基);而成人型具有α2βεδ结构(成人型特有AChR-ε亚基)。此外,乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)在某些血清中优先识别胎儿型AChR;而在其他血清优先识别成人型AChR。因此,RSR通过精细平衡溶解后的胎儿型和成人型AChR检测抗原的比例,建立了特异且敏感的AChRAb检测方法。将最佳比例的抗原混合物与放射性125I 标记α环蛇毒素结合,形成用于检测AChRAb125I -AChR。在检测中,待测血清和125I -AChR在室温下孵育,标记受体和受体抗体的复合物用抗人IgG免疫沉淀。经过后离心和洗涤步骤,检测放射性沉淀物即可计算出AChRAb的浓度。

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检测流程:


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试剂盒特点:

可靠便捷,同时检测胎儿型和成人型AChRAb

灵敏度:100%,于53例重症肌无力病的患者血清样本。

特异性:98%,于112例健康志愿者的血清。

标准品范围:0.25- 8 nmol/L

临界值:阴性: < 0.5 nmol/L; 阳性: ≥ 0.5 nmol/L

最低检测限:0.02 nmol/L

适用范围:RSR公司已加入英国NEQAS(英国质量评估体系),本产品可用于评价其他方法准确性 。

适用仪器:α计数器 。

样本要求:5微升人血清,避免使用脂血、溶血及血浆样本。

试剂盒规格:25测试,50测试,100测试。

储存条件:2-8ºC保存。


(四)肌肉特异性受体酪氨酸激酶抗体(MuSK Ab)检测

RSR MuSK Ab RIA检测原理:

在MuSK Ab 放免法检测中,作为抗原的MuSK 蛋白,被表达纯化后,用放射性同位素125I 标记。患者血清及对照中MuSK 抗体与125I-MuSK 相结合,室温孵育18 小时后,抗原抗体复合物与抗人免疫球蛋白G (IgG) 抗体形成免疫沉淀, 2-8℃孵育2 小时后,加入洗液并离心, 吸取上清液以除去未结合的标记蛋白。经过γ计数,试管内免疫沉淀物的放射量与样本抗体水平相对应,即沉淀物的放射计数越高,MuSK抗体的浓度越高。


MuSK Ab RIA操作流程:

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参考文献:

1. Oosterhuis HJ, Limburg PC, Hummel-Tappel E, et al. Anti-acetylcholine receptor antibodies in myasthenia gravis. Part 2. Clinical and serological follow-up of individual patients [J]. J Neurol Sci 1983; 58(3): 371-385.

2.Hewer R, Matthews I, Chen S, McGrath V, Evans M, Roberts E, et al. A sensitive non-isotopic assay for acetylcholine receptor autoantibodies. Clin Chim Acta 2006;364:159-66.

3.VoltzRD, Albrich WC, Nägele A, Schumm F, Wick M, Freiburg A, et al. Paraneoplasticmyasthenia gravis: Detection of anti-MGT30titinantibodies predicts thymicepithelial tumor. Neurology. 1997; 49(5): 1454-7.

4. Gilhus NE, Verschuuren JJ. Myasthenia gravis: subgroup classification and therapeutic strategies [J]. Lancet Neurol 2015; 14(10): 1023-1036.


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